鴨rab27a基因片段克隆及表達(dá)分析.doc
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鴨rab27a基因片段克隆及表達(dá)分析,①頁(yè)數(shù):11頁(yè)②字?jǐn)?shù):13557字③ 摘要:rab27a基因編碼rab基因家族的rab27a蛋白(ras like gtp-binding protein 27a),為黑色素細(xì)胞特有蛋白質(zhì)運(yùn)輸?shù)年P(guān)鍵基因。rab27a基因可以作為鴨黑羽性狀的候選基因。本研究用pcr方法擴(kuò)增了鴨rab27a基因的部分編碼區(qū)序列并進(jìn)行測(cè)序及...


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①頁(yè)數(shù):11頁(yè)
②字?jǐn)?shù):13557字
③ 摘要:RAB27A基因編碼Rab基因家族的Rab27a蛋白(Ras like GTP-binding protein 27A),為黑色素細(xì)胞特有蛋白質(zhì)運(yùn)輸?shù)年P(guān)鍵基因。RAB27A基因可以作為鴨黑羽性狀的候選基因。本研究用PCR方法擴(kuò)增了鴨RAB27A基因的部分編碼區(qū)序列并進(jìn)行測(cè)序及序列同源性分析;利用半定量RT-PCR方法分析了鴨RAB27A基因在組織表達(dá)的情況。結(jié)果表明,所克隆的鴨RAB27A基因片段為469bp,該基因與已報(bào)道的雞RAB27A基因核苷酸序列相似性為96 %;此基因僅在皮膚、肌肉和肝臟組織中表達(dá),其中皮膚的表達(dá)量最高,但在小腸、心臟、卵巢、腎臟、脾臟、肌胃組織中未見(jiàn)表達(dá);在各代鴨皮膚組織樣中,親本連城白鴨和白改鴨皮膚組織未見(jiàn)表達(dá),而雜交子代皮膚有表達(dá),且子代黑羽皮膚中表達(dá)量高于白羽皮膚。
④目錄:
摘要 Ⅱ
關(guān)鍵詞 Ⅱ
Abstract Ⅱ
Key words Ⅱ
1 前言 1
1.1 研究背景 1
1.2 RAB27A基因研究進(jìn)展 1
1.3 研究目的 2
2 材料與方法 2
2.1材料 2
2.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品 2
2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 2
2.1.3 主要儀器設(shè)備 2
2.2 方法 2
2.2.1 各組織總RNA的提取 2
2.2.2 各組織cDNA第一鏈的合成 3
2.2.3 引物的設(shè)計(jì) 3
2.2.4 PCR擴(kuò)增反應(yīng) 3
2.2.5 PCR產(chǎn)物回收與測(cè)序 4
2.2.6 cDNA序列的同源性分析 4
2.2.7 組織表達(dá)譜分析 4
3 結(jié)果與分析 4
3.1 RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果 4
3.2 鴨RAB27A基因的測(cè)序結(jié)果與同源性分析 5
3.3 組織表達(dá)譜分析 6
4 討論 8
4.1 鴨RAB27A基因的保守性 8
4.2 鴨RAB27A基因的組織表達(dá)譜分析 8
5 小結(jié) 9
參考文獻(xiàn) 9
⑤關(guān)鍵字:鴨;RAB27A基因;克??;表達(dá)分析
⑥參考文獻(xiàn):
1. 程寬維,江宵兵,章雙杰.連城白鴨資源特性、保護(hù)及開發(fā)方向.中國(guó)家禽,2003,25:46-48
2. 劉敬順.家雞羽色遺傳及應(yīng)用.養(yǎng)禽與禽病防治,1995,4:15-16
3. 劉甲斐,仇雪梅.黑色素及其相關(guān)基因的研究進(jìn)展.生物技術(shù)通報(bào),2002,4:55-58
4. 帕它木•莫合買提,洪新宇,金錫鵬.皮膚黑素細(xì)胞Rab27a基因與黑素小體的轉(zhuǎn)運(yùn).中華現(xiàn)代皮膚科學(xué)雜志,2004,1:230-232
5. 王建濤,李祥龍,周榮艷等.不同物種RAB27A基因完整編碼區(qū)生物信息學(xué)分析.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2007,23:64-67
6. 吳文林,吳穗潔.Rab蛋白的結(jié)構(gòu)、功能與研究展望.臺(tái)灣海峽,2006,25:599-605
7. 楊永升.雞MC1R基因的SNPs分析與染色體定位.[博士學(xué)位論文].杭州:浙江大學(xué)圖書館,2004
8. 應(yīng)牡英, 夏濤, 陳小冬.梅山豬Ghrelin和Motilin基因克隆、結(jié)構(gòu)分析及組織表達(dá)譜.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2006,28(4):559-565
9. 曾瑞霞, 蘇玉虹, 巴彩鳳等. 豬ERK6基因編碼區(qū)的克隆及組織表達(dá)譜分析. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué),2006,36 (11) :910-914
10. 張瑞杰,許杰,王增權(quán)等. 利用基因表達(dá)譜對(duì)組織樣品分類方法的研究. 中國(guó)衛(wèi)生統(tǒng)計(jì),2003,20(1):22-25
11. Bohadoran P, Aberdam E, Mantoux F, et al. Rab27a:A key to melanosome transport in human melanocytes. J Cell Biol, 2001, 152 (4) : 843-850
12. Hume A N, Collinson L M, Rapa K A, et al. Rab27a regulates the peripheral distribution of melanosomes in melanocytes. J Cell Biol, 2001, 152 (4) : 795-808
13. Kuroda T S, Fukuda M, Ariga H, et al. The Slp homology domain of synaptotagmin-like proteins 1–4 and Slac2 functions as a novel Rab27A binding domain. J Biol Chem, 2002 , 277: 9212–9218
14. Provance D W, Wei W, Ipe V, et al. Cultured melanocytes from dilute mice exhibit dendritic morphology and altered melanosome distribution. Proc Natl Acad Sci , 1996, 93:14554–14558
15. Provance D W, James T L, Mercer J A. Melanophilin, the product of the leaden locus, is required for targeting of myosin-Va to melanosomes. Traffic, 2002, 3: 124-132
16. Rudolf R, Kogel T, Kuzne S A, et al. Myosin Va facilitates the distribution of secretory granules in the F-actin rich cortex of PC12 cells. J Cell Sci, 2003, 116: 1339–1348
17. Tolmachova T, Anders R, Stinchcombe J, et al. A general role for Rab27a in secretory cells. Mol Biol Cell, 2004, 15: 332-344
18. Wilson S M, Yip R, Swing D A, et al. A mutation in Rab27a causes the vesicle transport defects observed in ashen mice . PNAS , 2000, 97(14): 7933-7938
19. Wu X, Bowers B, Rao K, et al. Visualization of melanosome dynamics within wild-type and dilute melanocytes suggests a paradigm for myosin V function in vivo. J Cell Biol, 1998, 143, 1899–1918
20. Zerial M, McBride H. Rab proteins as membrane organizers. Nat Rev Mol Cell Biol, 2002, 2: 107–117
本論文屬于本人的畢業(yè)論文,數(shù)據(jù)和結(jié)果都還沒(méi)有發(fā)表。
②字?jǐn)?shù):13557字
③ 摘要:RAB27A基因編碼Rab基因家族的Rab27a蛋白(Ras like GTP-binding protein 27A),為黑色素細(xì)胞特有蛋白質(zhì)運(yùn)輸?shù)年P(guān)鍵基因。RAB27A基因可以作為鴨黑羽性狀的候選基因。本研究用PCR方法擴(kuò)增了鴨RAB27A基因的部分編碼區(qū)序列并進(jìn)行測(cè)序及序列同源性分析;利用半定量RT-PCR方法分析了鴨RAB27A基因在組織表達(dá)的情況。結(jié)果表明,所克隆的鴨RAB27A基因片段為469bp,該基因與已報(bào)道的雞RAB27A基因核苷酸序列相似性為96 %;此基因僅在皮膚、肌肉和肝臟組織中表達(dá),其中皮膚的表達(dá)量最高,但在小腸、心臟、卵巢、腎臟、脾臟、肌胃組織中未見(jiàn)表達(dá);在各代鴨皮膚組織樣中,親本連城白鴨和白改鴨皮膚組織未見(jiàn)表達(dá),而雜交子代皮膚有表達(dá),且子代黑羽皮膚中表達(dá)量高于白羽皮膚。
④目錄:
摘要 Ⅱ
關(guān)鍵詞 Ⅱ
Abstract Ⅱ
Key words Ⅱ
1 前言 1
1.1 研究背景 1
1.2 RAB27A基因研究進(jìn)展 1
1.3 研究目的 2
2 材料與方法 2
2.1材料 2
2.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品 2
2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 2
2.1.3 主要儀器設(shè)備 2
2.2 方法 2
2.2.1 各組織總RNA的提取 2
2.2.2 各組織cDNA第一鏈的合成 3
2.2.3 引物的設(shè)計(jì) 3
2.2.4 PCR擴(kuò)增反應(yīng) 3
2.2.5 PCR產(chǎn)物回收與測(cè)序 4
2.2.6 cDNA序列的同源性分析 4
2.2.7 組織表達(dá)譜分析 4
3 結(jié)果與分析 4
3.1 RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果 4
3.2 鴨RAB27A基因的測(cè)序結(jié)果與同源性分析 5
3.3 組織表達(dá)譜分析 6
4 討論 8
4.1 鴨RAB27A基因的保守性 8
4.2 鴨RAB27A基因的組織表達(dá)譜分析 8
5 小結(jié) 9
參考文獻(xiàn) 9
⑤關(guān)鍵字:鴨;RAB27A基因;克??;表達(dá)分析
⑥參考文獻(xiàn):
1. 程寬維,江宵兵,章雙杰.連城白鴨資源特性、保護(hù)及開發(fā)方向.中國(guó)家禽,2003,25:46-48
2. 劉敬順.家雞羽色遺傳及應(yīng)用.養(yǎng)禽與禽病防治,1995,4:15-16
3. 劉甲斐,仇雪梅.黑色素及其相關(guān)基因的研究進(jìn)展.生物技術(shù)通報(bào),2002,4:55-58
4. 帕它木•莫合買提,洪新宇,金錫鵬.皮膚黑素細(xì)胞Rab27a基因與黑素小體的轉(zhuǎn)運(yùn).中華現(xiàn)代皮膚科學(xué)雜志,2004,1:230-232
5. 王建濤,李祥龍,周榮艷等.不同物種RAB27A基因完整編碼區(qū)生物信息學(xué)分析.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2007,23:64-67
6. 吳文林,吳穗潔.Rab蛋白的結(jié)構(gòu)、功能與研究展望.臺(tái)灣海峽,2006,25:599-605
7. 楊永升.雞MC1R基因的SNPs分析與染色體定位.[博士學(xué)位論文].杭州:浙江大學(xué)圖書館,2004
8. 應(yīng)牡英, 夏濤, 陳小冬.梅山豬Ghrelin和Motilin基因克隆、結(jié)構(gòu)分析及組織表達(dá)譜.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2006,28(4):559-565
9. 曾瑞霞, 蘇玉虹, 巴彩鳳等. 豬ERK6基因編碼區(qū)的克隆及組織表達(dá)譜分析. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué),2006,36 (11) :910-914
10. 張瑞杰,許杰,王增權(quán)等. 利用基因表達(dá)譜對(duì)組織樣品分類方法的研究. 中國(guó)衛(wèi)生統(tǒng)計(jì),2003,20(1):22-25
11. Bohadoran P, Aberdam E, Mantoux F, et al. Rab27a:A key to melanosome transport in human melanocytes. J Cell Biol, 2001, 152 (4) : 843-850
12. Hume A N, Collinson L M, Rapa K A, et al. Rab27a regulates the peripheral distribution of melanosomes in melanocytes. J Cell Biol, 2001, 152 (4) : 795-808
13. Kuroda T S, Fukuda M, Ariga H, et al. The Slp homology domain of synaptotagmin-like proteins 1–4 and Slac2 functions as a novel Rab27A binding domain. J Biol Chem, 2002 , 277: 9212–9218
14. Provance D W, Wei W, Ipe V, et al. Cultured melanocytes from dilute mice exhibit dendritic morphology and altered melanosome distribution. Proc Natl Acad Sci , 1996, 93:14554–14558
15. Provance D W, James T L, Mercer J A. Melanophilin, the product of the leaden locus, is required for targeting of myosin-Va to melanosomes. Traffic, 2002, 3: 124-132
16. Rudolf R, Kogel T, Kuzne S A, et al. Myosin Va facilitates the distribution of secretory granules in the F-actin rich cortex of PC12 cells. J Cell Sci, 2003, 116: 1339–1348
17. Tolmachova T, Anders R, Stinchcombe J, et al. A general role for Rab27a in secretory cells. Mol Biol Cell, 2004, 15: 332-344
18. Wilson S M, Yip R, Swing D A, et al. A mutation in Rab27a causes the vesicle transport defects observed in ashen mice . PNAS , 2000, 97(14): 7933-7938
19. Wu X, Bowers B, Rao K, et al. Visualization of melanosome dynamics within wild-type and dilute melanocytes suggests a paradigm for myosin V function in vivo. J Cell Biol, 1998, 143, 1899–1918
20. Zerial M, McBride H. Rab proteins as membrane organizers. Nat Rev Mol Cell Biol, 2002, 2: 107–117
本論文屬于本人的畢業(yè)論文,數(shù)據(jù)和結(jié)果都還沒(méi)有發(fā)表。
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